关键词搜索: 超声波细胞粉碎机,超声波清洗机,恒温水浴,高压均质机,基因导入仪,冷冻干燥机,微生物成长曲线分析仪,药物溶出仪,高低温循环装置,工艺流程温控系统

你的位置:首页 > 技术文章 > 基因导入仪的正确使用步骤

技术文章

基因导入仪的正确使用步骤

技术文章
  基因导入仪是一个更广义的概念,它指的是用于将外源基因导入目标生物体中的任何工具或方法。这些工具和方法可以包括不同种类的转染技术,如电转染、化学转染、微粒轰击等。
 
  基因导入仪工作原理
  细胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。
  在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,带电的外源物质以类似电泳的方式进入细胞膜。由于细胞膜磷脂双分子层的电阻很大,细胞外部电流场产生的细胞两极电压都被细胞膜承受,细胞质内分到的电压可以忽略不计,细胞质内部几乎没有电流,因此也决定了正常范围内的电转过程中细胞毒性很小。电场使DNA等物质进入细胞膜后只能停止在细胞膜附近,随后细胞本身的机制可以允许这些物质到细胞核等处。
  由于电转技术依靠的是物理方法,细胞表面的分子特性对电转影响比较小。相比化学转染方法和病毒载体转染方法,电转可以用在所有的细胞种类上,而且容易定量控制。
 

 

  基因导入仪的基本使用步骤
  1. 准备工作:确保使用前进行必要的消毒和清洁操作。检查导入仪的所有部件和配件是否完好无损。
  2. 准备目标细胞:根据实验要求,准备目标细胞的培养物。确保细胞处于最佳生长状态,适合进行基因导入。
  3. 准备外源基因:准备需要导入的外源基因片段。这可以是通过PCR扩增得到的DNA片段、合成的基因序列、质粒等。
  4. 设置导入条件:根据实验需求,调整导入仪的参数,如电压、电极间距、脉冲数量和脉冲宽度等。这些参数会根据目标细胞的特性和基因导入范围的不同而有所变化。
  5. 转染操作:将目标细胞与外源基因混合或处理,确保外源基因充分与目标细胞接触。根据导入仪的类型,可以选择合适的转染方法,如电转染、化学转染或微粒轰击。
  6. 应用导入条件:根据设置好的导入条件,施加电场、化学诱导剂或微粒轰击等。确保导入过程以及转染条件的控制时间恰当。
  7. 恢复细胞:根据转染后的细胞类型,选择适当的培养基和条件,进行培养和恢复期,以使细胞适应导入后的变化。
  8. 检测和分析:根据实验目的,可以使用合适的方法,如PCR、Western blot、流式细胞术等进行外源基因的表达和分析。
 
  需要注意的是,使用基因导入仪时应严格遵守实验操作指南和相关的生物安全规定。不同类型的基因导入仪可能有不同的使用步骤和注意事项,请根据具体的设备说明书和实验要求进行操作。
 

TEL:18106650612

扫码加微信